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      Calcein AM是一種能滲透細胞的染料，可用于測定大多數(shù)真核細胞的活力。Calcein AM是一種可對活細胞進行熒光標(biāo)記的細胞染色試劑，由于它在Calcein的基礎(chǔ)上加強了疏水性，因此能夠輕易穿透活細胞膜。在活細胞中，細胞質(zhì)內(nèi)的酯酶水解乙酰氧甲酯之后，非熒光的鈣黃綠素 AM 轉(zhuǎn)化為綠色熒光鈣黃綠素 。與其它同類試劑相比，Calcein-AM是最適合作為熒光探針去染活細胞的，因為它的細胞毒性很低。Calcein不會抑制任何的細胞功能如增殖或淋巴球的趨化性。使用了Calcein的活性檢測的實驗結(jié)果是十分可信并 且與標(biāo)準(zhǔn)的51Cr-釋放法所得結(jié)果相一致的。Calcein的激發(fā)和發(fā)射波長分別為494 nm和515 nm。Calcein AM可與PI結(jié)合使用，分別對活細胞和死細胞染色，可用于同時對活細胞和死細胞進行熒光染色。

產(chǎn)品特性

      激發(fā)和發(fā)射波長:494/515 (after cleavage)

      運輸條件:冰袋運輸

      存儲條件:-20oC,避光

      分子式:C45H45N2O23

      分子量:994.87

      CAS 號:148504-34-1

染色原理

實驗步驟

      1. 用1 ml無水DMSO溶解1 mg Calcein AM，制備成1 mmol/l的Calcein-AM母液，-20℃下密閉冷凍保存。

      2. 用PBS或DMSO將Calcein AM母液稀釋制成1-50 μM的Calcein AM溶液(現(xiàn)配現(xiàn)用)。

      3. 吸掉預(yù)培養(yǎng)好的細胞中的培養(yǎng)基，用合適的緩沖液清洗2-3次。

      4.加入適量的Calcein AM溶液， 在37℃培養(yǎng)細胞15-30分鐘。

      5. 用PBS或適當(dāng)?shù)木彌_液洗滌細胞兩次。

      6. 用494 nm激發(fā)波長，515 nm發(fā)射波長的濾光片的熒光顯微鏡觀察細胞。如果Calcein AM很難進入細胞，可以使用表面活性劑。

案例分析

注意事項

      1、試劑容易吸潮，從冰箱取出后，請確認在干燥的環(huán)境放至室溫后再開封。由于試劑極其微量，開封前，請輕彈管壁幾次，以保證粉末落入管底。

      2、第一次使用時, 建議母液即配即用。試劑溶解后盡可能在短時間內(nèi)使用，以保證實驗效果。

      3、溶解液 DMSO 需要保證新鮮無水，否則將會導(dǎo)致 AM 體水解，使熒光染料無法進入細胞，影響實驗效果。

      4、母液遇水極易分解，如果不能一次用完，建議分裝保存，例如分裝成 5 μl/管，用封口膜封口，并用鋁箔紙包裹，放在一個密閉性能好的塑料袋中，并放入一包干燥劑，在≤-20℃密封避光保存。

      5、建議您在正式實驗前先摸索一下細胞量、染色試劑的終濃度、培養(yǎng)時間等，找到最佳實驗條件。