400-830-9659
產(chǎn)地:ABC
貨號(hào):ABC4119
規(guī)格:1000T
備注:代謝活性檢測(cè)法,可高通量操作,但最終溶解步驟易造成實(shí)驗(yàn)較大誤差
本產(chǎn)品MTT檢測(cè)試劑盒,廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和活性測(cè)定,以及藥物對(duì)細(xì)胞毒性的檢測(cè)。MTT全稱(chēng)為3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,中文名噻唑藍(lán)。其檢測(cè)原理為活細(xì)胞線(xiàn)粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源底物MTT還原為不溶于水的藍(lán)紫色甲臜(Formazan)并沉積在細(xì)胞中,而死細(xì)胞無(wú)此功能。再利用二甲基亞砜(DMSO)溶解細(xì)胞中的甲臜沉積物,用酶標(biāo)儀于490 nm或570 nm波長(zhǎng)處測(cè)定其光吸收值,在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi),甲臜形成的量與活細(xì)胞數(shù)成正比。根據(jù)測(cè)得的吸光度值(OD值),來(lái)判斷活細(xì)胞數(shù)量,OD值越大,活細(xì)胞數(shù)越多,細(xì)胞活性越強(qiáng)(如果是測(cè)藥物毒性,則表示藥物毒性越小)。使用本試劑盒檢測(cè)細(xì)胞活性時(shí),在進(jìn)行反應(yīng)后需吸除上清,因此不能用于懸浮細(xì)胞的檢測(cè)。如需檢測(cè)懸浮細(xì)胞,建議使用本公司其他產(chǎn)品(ABC4121 CCK-8試劑盒)。
儲(chǔ)存與運(yùn)輸
冰袋(wet ice)運(yùn)輸;4℃避光保存,有效期3個(gè)月;或-20℃避光保存,有效期12個(gè)月,避免反復(fù)凍融。
操作步驟
1. 貼壁細(xì)胞處理:待細(xì)胞貼壁后,按照實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)進(jìn)行加藥、轉(zhuǎn)染等處理;
2. 細(xì)胞活性檢測(cè):每孔加入20 μL MTT工作液,在細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)孵育4 h;
3. 去除上清:完成孵育后,會(huì)發(fā)現(xiàn)孔板底部出現(xiàn)少量紫色結(jié)晶,可在40倍顯微鏡下觀察。用移液槍小心吸除孔板內(nèi)上清溶液(切勿吸到底部紫色結(jié)晶);
4. 顯色:向孔板中加入100 μL DMSO,37℃孵育15 min左右(可用手指輕微敲擊板底小幅度震蕩),待紫色結(jié)晶全部溶解。如果紫色結(jié)晶較小較少,溶解的時(shí)間會(huì)短一些;如果紫色結(jié)晶較大較多,可適當(dāng)延長(zhǎng)溶解時(shí)間;
5. 檢測(cè):在波長(zhǎng)490 nm或570 nm處測(cè)定吸光度。如無(wú)570 nm濾光片,可使用560-600 nm濾光片。
注意事項(xiàng)
1. DMSO在較低溫度時(shí)會(huì)凝固,可于37℃復(fù)溶后不影響使用。
2. 本試劑盒檢測(cè)原理是依賴(lài)于脫氫酶催化的反應(yīng),樣品中如有較多還原劑(例如一些抗氧化劑)會(huì)干擾檢測(cè),需設(shè)法去除。
3. 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
本產(chǎn)品僅供科研用途,不用于臨床診斷!
(產(chǎn)品包裝升級(jí)中,以實(shí)物為準(zhǔn)。)
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